摘要：

多聚甲醛〔PFA〕是一種常用固定劑，大量用途于生物學(xué)研究中，特別是于免疫熒光、原位雜交實(shí)驗(yàn)中。它通過和蛋白質(zhì)中氨基有交聯(lián)反應(yīng)，穩(wěn)固細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞形態(tài)、蛋白分布保存。然而，固定細(xì)胞時間要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)?、樣品特性進(jìn)行調(diào)整，以達(dá)到最佳效果。

通常狀況下，多聚甲醛固定細(xì)胞時間范圍為15分鐘到4小時不。對于快速檢測或初次實(shí)驗(yàn)，建議從較短時間開始，如1530分鐘。這樣可以避免過度固定導(dǎo)致抗原表位被掩蓋，影響后續(xù)抗體結(jié)合效率。如果目標(biāo)是觀察細(xì)胞骨架或其他精細(xì)結(jié)構(gòu)，則也許要更長時間，一般為24小時。另外，于較高溫度下固定〔例如室溫〕，可以縮短所需時間；而低溫操作則需適當(dāng)延長固定時長。

于實(shí)際操作過程中，還需注意以下幾點(diǎn)：，固定液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，并保持適當(dāng)濃度〔常用4% PFA〕。固定前應(yīng)對樣本進(jìn)行適當(dāng)預(yù)處理，比如清洗去除多余液體或組織碎片。再次，于固定完成后，及時用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞表面殘留多聚甲醛，防止其繼續(xù)作用損害樣本質(zhì)量。最后，固定時間選擇還應(yīng)結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)需求及設(shè)備條件綜合考慮，確保獲得清晰可靠實(shí)驗(yàn)結(jié)果。合理設(shè)置固定時間是成功開展相關(guān)研究關(guān)鍵步驟。